Как попасть в сеть нейтрофилов

Мы уже писали про нетоз нейтрофилов, в ходе которого они погибают, одновременно выбрасывая сети ДНК для «ловли» патогенов. Теперь ученые придумали способ измерения «сетевой» активности этих клеток.

Микроскопия ДНК, высвобождающейся при нетозе

В статье, опубликованной в журнале Cytometry, описан метод измерения нетоза нейтрофилов методом проточной цитометрии.

Зачем измерять нетоз? Хотя он является необходимым событием для реализации врожденного иммунитета, высвобождение внутриклеточных компонентов может приводить к повреждению клеток сосудов и формированию тромбов. Возможно даже появление аутоантител к некоторым компонентам, что, по всей видимости, играет роль в развитии системной красной волчанки и васкулита, а также ревматоидного артрита, антифосфолипидного синдрома и подагры.Таким образом, для изучения этих заболеваний необходим простой, объективный и точный способ измерения нетоза.
В настоящее время самым популярным методом остается микроскопия, но этот метод имеет недостатки — субъективность анализа и трудности с количественным анализом. Кроме того, микроскопию сложно применять, когда речь идет о биологических жидкостях — сыворотке, или о среде, в которой клетки культивируются. ДНК можно «покрасить» с помощью флюоресцентных красителей, таких, как Picogreen, но отличить при этом нетозную ДНК от нуклеиновых кислот, высвобождающихся при некрозе, невозможно. Нет в продаже и наборов для иммуноферментного определения нетоза.
Проточная цитометрия позволяет избежать многих проблем. Этот метод заключается в измерении светорассеяния и флюоресценции частиц, проходящих друг за другом через лазерный луч в тонком капилляре. Для анализа нетоза ученые стимулировали этот процесс форбол миристат ацетатом, и окрашивали их флюорохромом SYTOX Green, связывающимся с ДНК. Краситель SYTOX Green используется уже длительное время, но впервые было показано, что с его помощью можно обнаруживать нейтрофилы, подверженные нетозу, в то же время с помощью этого метода можно «отбраковать» клетки, которые погибают путем апоптоза.

Так выглядят графики, получаемые при помощи проточной цитометрии.

Автор: Павел Несмиянов

Masuda S. et al. Measurement of NET formation in vitro and in vivo by flow cytometry. Cytometry A. 2017 Jul 17. doi: 10.1002/cyto.a.23169.