Иммуноферментный анализ

Иммуноферментный анализ (ИФА, EIA, ELISA [от англ. Enzyme ImmunoSorbent Assay]) это вид имунологического исследования, используемый для количественного и качественного определения антигенов и антител в биологических образцах. Некоторые примеры: диагностика ВИЧ-инфекции, тест на беременность, измерение концентрации цитокинов или растворимых рецепторов в плазме крови. Обычно ИФА выполняется в формате 96-луночного планшета, что позволяет одновременно исследовать несколько дестяков образцов. Первым этапом такого теста является нанесение антигена или антитела на поверхность дна каждой лунки. Как правило это происходит еще на заводе, где производят тест-систему.
Метод ИФА, представленный на анимации ниже, является так называемым «сэндвич»-ИФА. Сэндвич здесь складывается из двух видов антител и одного антигена. Захватывающие антитела находятся на дне лунки. После добавления жидкости, содержащей антиген, инкубации и отмывки от несвязавшегося антигена, получается «половина бутерброда». Следующей задачей является обнаружение количества связавшегося антигена. Для этого используются антитела, к которым «привязана» молекула фермента (как правило, пероксидаза). При добавлении эти антитела связываются со свободным участком «пойманного» антигена и также остаются на дне лунки даже после промывания. Чтобы визуально определить, какое количество «сэндвичей» в итоге сформировалось, добавляют субстрат, который под действием пероксидазы меняет свой цвет. Интенсивность окраски раствора можно точно определить с использованием специального фотометра (ридера). Иногда в качестве субстрата используют люминесцирующее вещество, которое начинает светиться под действием пероксидазы. В этом случае интенсивность свечения можно определить с помощью люминометра. Такой способ применяется в высокопроизводительных автоматических анализаторах, стоящих на вооружении клинических лабораторий.